BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
HỆ THỐNG THÔNG TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  22,462,348
  • Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

Công nghệ sinh học trong nông nghiệp khác

Hồ Thị Thương, Nguyễn Thị Thơm, Nguyễn Thị Trà, Trịnh Thái Vy, Phạm Bích Ngọc, Lê Văn Sơn, Nguyễn Thị Bích Ngọc(1), Chu Hoàng Hà

Nghiên cứu tạo kháng thể đơn chuỗi đặc hiệu kháng nguyên Ompa của vi khuẩn gây bệnh vàng lá gân xanh trên cây có múi

Tạp chí Công nghệ Sinh học - Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam

2020

3

529-541

1811-4989

Bệnh vàng lá, Cây ăn quả, Gen, Sinh học, Mã hóa

Bệnh vàng lá gân xanh hay còn gọi là HuangLongbing (HLB) được xem là một trong những bệnh hại nguy hiểm nhất trên cây ăn quả có múi. Bệnh làm hạn chế việc sản xuất cây ăn quả có múi ở khắp nơi trên thế giới. Phương pháp sản xuất kháng thể kháng protein Ompa của vi khuẩn Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas) để phát hiện bệnh vàng lá gân xanh đang được xem là hướng nghiên cứu triển vọng. Trong nghiên cứu này, với mục đích sản xuất kháng thể đơn chuỗi kháng kháng nguyên Ompa của vi khuẩn CLas, đầu tiên, chúng tôi sử dụng thư viện kháng thể nanobody (single variable domain, VHH) của Lạc đà để sàng lọc các kháng thể đơn chuỗi VHH kháng kháng nguyên Ompa bằng kỹ thuật bộc lộ phage M13 (phage-display). Tiếp đến, các dòng phage đơn 21, 33, 53, 56, 59 cho kết quả ELISA cao với kháng nguyên Ompa được lựa chọn để tách phagemid và đoạn gen mã hóa các kháng thể VHH được giải trình tự. Đoạn gen mã hóa cho kháng thể 53-VHH có ái lực với Ompa tốt nhất được lựa chọn và chèn vào vector biểu hiện pET-21a(+), sau đó nhân dòng trong chủng E. coli DH5α và biểu hiện trong chủng BL21 (DE3). Kháng thể đơn chuỗi 53-VHH kháng Ompa được tối ưu sự biểu hiện ở các nhiệt độ khác nhau (37 oC, 28 oC và 15 oC) với nồng độ cảm ứng IPTG 0,1 M. Kháng thể 53-VHH kháng Ompa được tinh sạch thành công dưới điều kiện biến tính, sau đó tái cuộn gấp. Hoạt tính sinh học của kháng thể đơn chuỗi 53-VHH kháng kháng nguyên Ompa được đánh giá bằng phản ứng ELISA gián tiếp. Kết quả cho thấy, kháng thể đơn chuỗi 53-VHH có tương tác rất tốt với kháng nguyên Ompa. Điều này mở ra triển vọng ứng dụng kháng thể đơn chuỗi 53- VHH trong việc phát hiện bệnh vàng lá gân xanh trên cây có múi.

TTKHCNQG, CVv 262

Xem toàn văn
  • [1] Yuan Q, Jordan R, Brlansky RH, Minenkova O, Hartung J (2016), Development of single chain variable fragment (scFv) antibodies against surface proteins of Ca. Liberibacter asiaticus.,J Microbiol Methods 122: 1-7.
  • [2] Thomassen YE, Verkleij AJ, Boonstra J, Verrips CT (2005), Specific produc-tion rate of VHH antibody fragments by Sacc-haromyces cerevisiaeis correlated with growth rate, independent of nutrient limitation.,J Biotechnol 118: 270–277
  • [3] Teixeira DC, Saillard C, Couture C, Martins EC, Wulff NA, Eveillard JS, Yamamoto PT, Ayres AJ, Bové JM (2008), Distribution and quantification of Candidatus Liberibacter americanus, agent of huanglongbing disease of citrus in São Paulo State, Brasil, in leaves of an affected sweet orange tree as determined by PCR.,Mol Cell Probes 22: 139–150.
  • [4] Shen W, Halbert SE, Dickstein E, Manjunath KL, Shimwela MM, van Bruggen AHC (2013), Occurrence and in-grove distribution of citrus Huanglongbing in North Central Florida.,J Plant Pathol 95: 361–371.
  • [5] Rajabi BM, Rasaee MJ, Foruzandeh M, Rahimpour A, Kiani J, Rahbarizadeh F, Alirezapour B, Mohammad M (2007), Production of chimeric recombinant single domain antibodygreenfluorescent fusion protein in Chinese hamster ovarycells.,Hybridoma 26: 1–9.
  • [6] Olichon A, Schweizer D, Muyldermans S, de Marco A (2007), Heating as a rapid purification method for recovering correctly-folded thermotolerant VH and VHH domains.,BMC Biotechnol 7: 83–94.
  • [7] Manfred G, Udo C (2009), Immunomodulation of Plant Function by In Vitro Se-lected Single-Chain Fv Intrabodies.,Methods in Molecular Biology, Recombinant Proteins F-rom Plants, vol. 483 © Humana Press, a part of Springer Science+ Business Media, LLC 2009.
  • [8] Joosten V, Roelofs MS, van den Dries N, Goosen T, Verrips CT, van den Hon-del CA, Lokman BC (2005), Production of bifunctional proteins by Aspergillus awamori: llama variable heavy chain antibody fragment (VHH) R9 coupled to Arthromyces ramosus peroxidase (ARP).,J Biotechnol 120: 347–359
  • [9] Gottwald TR, da Gracia JV, Bassanezi RB (2007), Citrus huanglongbing: the pathogen, its epidemiology, and impact.,Plant Health Progress.
  • [10] Gottwald TR (2010), Current epidemiological understanding of citrus huanglongbing.,Annu Rev Phytopathol 48: 119–139.
  • [11] Garnier M, Gao SJ, He YL, Villechanoux S, Gandar J, Bové JM (1991), Study of the Greening Organism (GO) with Monoclonal Antibodies: Serological Identification, Morphology, Serotypes and Purification of the GO. IOCV, Riverside, California.,
  • [12] Ding F, Paul C, Brlansky R, Hartung JS (2017), Immune tissue print and immune capture-PCR for diagnosis and detection of Candidatus Liberibacter asiaticus.,Sci Rep 7: 46467
  • [13] Ding F, Duan Y, Yuan Q, Shao J, Hartung JS (2016), Serological detection of ‘Candidatus Liberibacter asiaticus’ in citrus, and identification by GeLCMS/MS of a chaperone protein responding to cellular pathogens.,Sci Rep 6: 29272.
  • [14] Ding F, Duan Y, Paul C, Brlansky RH, Hartung JS (2015), Localization and distribution of “Candidatus Liberibacter asiaticus” in citrus and periwinkle by direct tissue blot immuno assay with an Anti-Ompa polyclonal antibody.,PLOS ONE 10: e0123939.
  • [15] Deffar K, Shi H, Li L, Wang X, Zhu X (2009), Nanobodies-the new concept in antibody engineering.,Afr J Biotechnol l8: 2645–2652.
  • [16] Da Graca JV (1991), Citrus greening disease.,Annu Rev Phytopathol 29: 109-136.
  • [17] Cortez-Retamozo V, Backmann N, Senter PD, Wernery U, De BP, Muyldermans S, Revets H (2004), Efficient cancer therapy with a nanobody-based conjugate.,Cancer Res 64: 2853–2857.
  • [18] Conrad U, Plagmann I, Malchow S, Sack M, Floss DM, Kruglov AA, Nedospasov SA, Rose-John S, Scheller J (2011), ELPylated anti-human TNF therapeutic single-domain antibodies for prevention of lethal septic shock.,Plant Biotechnol J 9: 22–31
  • [19] Bové JM (2006), Huanglongbing: Adestructive, newly-emerging, century-old disease of citrus.,JPP 88: 7–37.
  • [20] Arredondo VR, Delgado OJC, Beltrán BM, Anguiano CJ, Cerna CE, Rodríguez PY, Ochoa FYM (2016), Areview of techniques for detecting Huanglongbing (greening) in citrus.,Can J Microbiol 62: 803–811.