BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
HỆ THỐNG THÔNG TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  22,334,443
  • Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

Các công nghệ sản phẩm sinh học, vật liệu sinh học, chất dẻo sinh học, nhiên liệu sinh học, các hóa chất được chiết tách từ sinh học, các vật liệu mới có nguồn gốc sinh học.

Nguyễn Thanh Tấn(1), Nguyễn Thị Thùy Trinh, Trần Văn Hiếu(2)

Tạo dòng, biểu hiện và tinh sạch Protein A-L2 bằng silica

Cloning, expression and purification of the recombinant Protein A-L2 using silica

Khoa học (Đại học Cần Thơ)

2022

CĐKHTN

8-13

1859-2333

Cảm biến sinh học, Protein A, Protein L2, Protein A-L2, Silica

Protein A, Protein L2, Protein A-L2, Silica, Biosensors

Các hạt silica (SiO2) được cố định protein là vật liệu đầy triển vọng trong các lĩnh vực y sinh hay cảm biến sinh học. Những nghiên cứu trước cho thấy protein ribosome L2 của vi khuẩn Escherichia coli liên kết mạnh với các hạt silica. Ngoài ra, protein A là thụ thể bề mặt có tính ổn định cao, có nguồn gốc từ vi khuẩn Staphylococcus aureus, sự liên kết giữa protein A và kháng thể được xem là một trong những tương tác protein-protein kinh điển được nghiên cứu nhiều nhất hiện nay. Nghiên cứu này được tiến hành nhằm tạo tiểu phần protein A dung hợp với protein L2 tái tổ hợp bằng cách cấu trúc vector pET22b-proAx1-L2. Protein được biểu hiện thông qua hệ thống E. coli BL21(DE3) và được kiểm tra bằng SDS-PAGE. Dựa vào sự liên kết đặc hiệu với hạt silica, Protein A-L2 được tinh sạch bằng các hạt silica trần không biến tính và sử dụng dung dịch MgCl2 nồng độ cao để dung ly protein mục tiêu. Phương pháp tinh sạch bằng hạt silica sẽ mang lại hiệu quả như tinh sạch nhanh chóng, tiết kiệm chi phí và độ tinh sạch tương đối.

Protein immobilized silica (SiO2) particles are promising materials in the fields of biomedicine or biosensors. Through previous studies, it was found that the Escherichia coli ribosomal protein L2 strongly binds to silica particles. In addition, protein A which is derived from Staphylococcus aureus bacteria, is a highly stable surface receptor. The interaction between protein A and antibodies is considered one of the classical protein-protein interactions. This study created a fusion protein A subunit with recombinant L2 protein by constructing the vector pET22b-proAx1-L2. The Protein A-L2 was expressed in E. coli BL21(DE3) system and analyzed using SDS-PAGE. Based on the specific binding to silica particles, Protein A-L2 was purified by unmodified bare silica particles and a high concentration of MgCl2 solution. With the purification method by silica beads, high efficiencies were achieved, such as rapid purification, cost savings, and comparative purity.

TTKHCNQG, CVv 403

Xem toàn văn
  • [1] Taniguchi, K., Nomura, K., Hata, Y., Nishimura, T., Asami, Y., Kuroda, A. J. B., & Bioengineering. (2007), The Si‐tag for immobilizing proteins on a silica surface,Biotechnology and Bioengineering, 96(6), 1023-1029. https://doi.org/10.1002/bit.21208
  • [2] Rosano, G. L., & Ceccarelli, E. A. J. F. i. m. (2014), Recombinant protein expression in Escherichia coli: advances and challenges,Frontiers in Microbiology, 5, 172. https://doi.org/10.3389/fmicb.2014.00172
  • [3] Rahman, W. N., Corde, S., Yagi, N., Abdul Aziz, S. A., Annabell, N., & Geso, M. (2014), Optimal energy for cell radiosensitivity enhancement by gold nanoparticles using synchrotron-based monoenergetic photon beams,Int J Nanomedicine, 9, 2459-2467. doi:10.2147/IJN.S59471 https://doi.org/10.2147/IJN.S59471
  • [4] Nguyen, T.-T., Vo-Nguyen, H.-V., & Tran-Van, H. (2021), Prokaryotic expression of chimeric GFPhFc protein as a potential immune-based tool,Molecular Biology Research Communications, 10(3), 105
  • [5] Manat, Y., Shustov, A., Evtehova, E., & Eskendirova, S. (2016), Expression, purification and immunochemical c-haracterization of recombinant OMP28 protein of Brucella species,Open Veterinary Journal, 6(2), 71-77. https://doi.org/10.4314/ovj.v6i2.1
  • [6] Mai, Q.-G., Vo-Nguyen, H.-V., Tran, T. L., & TranVan, H. J. J. o. A. B. R. (2022), All-in-One Molecular Cloning as a New Gene Manipulation Method,Journal of Applied Biotechnology Reports, 9(1), 511-515. https://doi.org/10.1073/pnas.97.10.5399
  • [7] Ikeda, T., Ninomiya, K.-i., Hirota, R., Kuroda, A. J. P. e., & purification. (2010), Single-step affinity purification of recombinant proteins using the silica-binding Si-tag as a fusion partner,Protein expression and purification, 71(1), 91-95. https://doi.org/10.1016/j.pep.2009.12.009
  • [8] Graille, M., Stura, E. A., Corper, A. L., Sutton, B. J., Taussig, M. J., C-harbonnier, J.-B., & Silverman, G. J. J. P. o. t. N. A. o. S. (2000), Crystal structure of a Staphylococcus aureus protein A domain complexed with the Fab fragment of a human IgM antibody: structural basis for recognition of B-cell receptors and superantigen activity,Proceedings of the National Academy of Sciences, 97(10), 5399-5404
  • [9] Fuchs, S. M., & Raines, R. T. J. P. S. (2005), Polyarginine as a multifunctional fusion tag,Protein science, 14(6), 1538-1544. https://doi.org/10.1110/ps.051393805
  • [10] Cha, T., Guo, A., & Zhu, X. Y. J. P. (2005), Enzymatic activity on a chip: the critical role of protein orientation,Proteomics, 5(2), 416-419. https://doi.org/10.1002/pmic.200400948