Xây dựng phương pháp phát hiện và định lượng vi khuẩn Bacillus subtilis bằng kỹ thuật realtime PCR

Chỉ số đề mục

Lĩnh vực nghiên cứu

Công nghệ sinh học liên quan đến thao tác với các tế bào, mô, cơ quan hay toàn bộ sinh vật; công nghệ tế bào gốc

Dạng tài liệu

Tác giả

Đặng Thị Hường, Trần Hồng Ba, Lê Thành Long, Nguyễn Văn Cường, Ninh Thị Hạnh, Nguyễn Thành Trung⁽¹⁾, Nguyễn Thị Xuân Hường, Lê Thị Hồng Hảo

Nhan đề

Xây dựng phương pháp phát hiện và định lượng vi khuẩn Bacillus subtilis bằng kỹ thuật realtime PCR

Nhan đề tiếng anh

New realtime PCR method development for detection and quantification of Bacillus subtilis

Nguồn trích

Tạp chí Kiểm nghiệm và an toàn thực phẩm

Năm xuất bản

2022

Số

3

Trang

323-334

ISSN

2615-9252

Từ khóa

Realtime PCR, Bacillus subtilis, aprE, probiotic.

Từ khóa tiếng anh

Realtime PCR, Bacillus subtilis, AprE, Probiotic

Tóm tắt

Bacillus subtilis là loài vi khuẩn được ứng dụng rộng rãi trong sản xuất probiotic. Các chủng thuộc loài này có khả năng tạo nội bào tử, chịu được điều kiện pH acid của dạ dày và nhiều chủng đã được chứng minh có khả năng sản xuất các enzyme hỗ trợ tiêu hóa thức ăn và ức chế các loại vi khuẩn gây bệnh. Trong nghiên cứu này, phương pháp phát hiện và định lượng Bacillus subtilis đã được xây dựng dựa trên việc nhân gen aprE bằng kỹ thuật realtime PCR. Gen aprE mã hóa tiền chất của độc tố subtilisin và là một gen đặc hiệu, có tính bảo tồn cao của B. subtilis. Phương pháp được đánh giá có độ nhạy cao với giới hạn phát hiện là 102 CFU/mL, giới hạn định lượng là 102 CFU/mL, độ đặc hiệu và độ chính xác đều đạt 100%. Các đường cong chuẩn được xây dựng bằng cách sử dụng chu kỳ ngưỡng (Ct) so với mật độ vi khuẩn B. subtilis thể hiện tương quan tuyến tính (R2 = 1, độ dốc = - 3,584).

Tóm tắt tiếng anh

Bacillus subtilis is a widely used bacterial strain in probiotic production. The strains belong to this species are endosporogenic, tolerant to acidic pH conditions in the stomach, and many have been shown to produce enzymes that aid in food digestion and inhibit pathogenic microorganisms. In this study, a detection and qualitification method was developed based on amplification of aprE gene ultilising realtime PCR. The aprE target gene encodes subtilisin toxin precursor and is a highly conservative and specific gene of B. subtilis. The method yielded high sensitivity with LOD is 102 (CFU/mL), LOQ is 102 (CFU/mL), specificity, and accuracy are both 100%. The preparatory tools were constructed using cycle threshold (Ct) compare with B. subtilis concentration, which showed linear correlation (R2 = 1, slope = - 3.584)

Kí hiệu kho

TTKHCNQG, CTv 165

File toàn văn

Xem toàn văn