BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
HỆ THỐNG THÔNG TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  24,639,962
  • Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

Công nghệ sinh học

Phùng Thị Thu Hương, Trần Hồng Diễm(1)

Tinh sạch protein Saccharomyces cerevisiae Crp1 tái tổ hợp

Purification of Saccharomyces cerevisiae recombinant Crp1

Tạp chí khoa học và công nghệ - Đại học Nguyễn Tất Thành

2018

04

22-26

2615-9015

ADN, Crp1, Mus81, Tinh sạch, Tái tổ hợp

Phức hợp Mus81-Mms4 là một endonuclease cắt các cấu trúc ADN đặc hiệu ở Saccharomyces cerevisiae. Mus81- Mms4 tham gia vào việc xử lí các cấu trúc trung gian tái tổ hợp mà được hình thành trong quá trình sửa chữa chạc sao chép dừng/lỗi và đứt gãy sợi đôi ADN. Mus81-Mms4 hoạt động với nhiều protein liên quan đến sửa chữa ADN, ổn định chạc sao chép, và hình thành/phân giải các phân tử nối trong con đường sửa chữa bằng tái tổ hợp tương đồng. Một nghiên cứu sàng lọc hóa sinh nhằm tìm kiếm protein có khả năng tăng cường hoạt tính endonuclease của Mus81-Mms4 trên cơ chất ưa thích của phức hợp in vitro đã cho kết quả rằng Crp1, protein nhận biết ADN có cấu trúc cruciform mà có khả năng bám một cách đặc hiệu lên các cấu trúc ADN bốn nhánh tương tự như mối nối Holliday, có thể là kích thích tố tiềm năng của hoạt tính endonuclease của Mus81-Mms4. Nhằm chứng minh tương tác chức năng giữa Crp1 và Mus81-Mms4 in vitro, chúng tôi tiến hành tinh sạch protein Crp1 tái tổ hợp sử dụng hệ thống Escherichia coli. Kết quả thu được thể hiện rằng Crp1 tinh sạch có độ đồng thể cao và có hoạt tính bám ADN cấu trúc đặc hiệu, phù hợp với yêu cầu của các thí nghiệm hóa sinh tiếp theo.

A complex Mus81-Mm4 is a DNA structure–specific endonuclease in Saccharomyces cerevisiae. Mus81-Mms4 functions in processing of recombination intermediates that could arise during the repair of stalled and blocked replication forks and double stranded breaks. Mus81-Mms4 works with many proteins involved in DNA repair, replication fork stability, and joint molecule formation/resolution during homologous recombination repair. A biochemical screening of protein(s) that enhances the Mus81-Mms4 endonuclease activity on its preferable substrates in vitro revealed that Crp1, a cruciform DNA-recognizing protein, which can specifically bind to DNA four-way junction structures like Holliday junctions could be the potential factor. To further demonstrate that Crp1 interacts functionally with Mus81-Mms4 in vitro, we carried out the purification of recombinant Crp1 using Escherichia coli system. Our results showed that the purified Crp1 was highly homogenous and active that is ready for biochemical use.

TTKHCNQG, CVv 503

Xem toàn văn