BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
HỆ THỐNG THÔNG TIN QUỐC GIA VỀ KHOA HỌC, CÔNG NGHỆ VÀ ĐỔI MỚI SÁNG TẠO

Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  33,264,968
  • Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

10603 - Vi sinh vật học

Ngô Thị Kim Hằng, Trần Nguyễn Thảo Sương(2), Trần Văn Hiếu(1), Nguyễn Phan Viễn Phương

Tạo dòng và biểu hiện interleukin 2 (IL-2) người tái tổ hợp trong Escherichia coli

Cloning and expressing human recombinant interleukin 2 (IL-2) in Escherichia coli

Khoa học (ĐH Cần Thơ)

2020

2B

53-58

1859-2333

E. coli, Interleukin 2, Origami, Thể vùi

E. coli, Interleukin 2, Inclusion bodies, Origami

Liệu pháp miễn dịch sử dụng interleukin 2 (IL-2) đã được FDA chấp thuận sử dụng cho việc điều trị một số bệnh ung thư và hỗ trợ điều trị HIV/AIDS. Nhằm mục tiêu sản xuất IL-2 tái tổ hợp với giá thành rẻ, đề tài được triển khai nhằm dòng hóa và biểu hiện IL-2 trong Escherichia coli. Gen il2 được khuếch đại bằng phương pháp PCR sử dụng khuôn là plasmid pIDT-IL2 với cặp mồi đặc hiệu IL2-F và IL2-R chứa vị trí nhận biết của enzyme BamHI và NdeI. Sản phẩm khuếch đại được xử lý với enzyme BamHI và NdeI và chèn vào vector biểu hiện pET-His tạo nên plasmid tái tổ hợp pET-il2. Plasmid pET-il2 được biến nạp vào E. coli Origami(DE3) tạo nên dòng tái tổ hợp Origami(DE3)/pET-il2. Dòng tế bào này khi được cảm ứng biểu hiện bằng 0,5 mM IPTG đã tạo protein IL-2 biểu hiện vượt mức ở dạng thể vùi trong tế bào chất. Sự biểu hiện protein mục tiêu được kiểm chứng bằng SDS-PAGE và lai Western với kháng thể kháng protein IL-2.

Immunotherapy using interleukin 2 (IL-2) was approved by FDA for the treatment of some solid tumors and for the combination with AIDS/HIV’s HAART. In order to produce recombinant interleukin 2 with low price, the project was initiated to clone and express IL-2 in Escherichia coli. The il2 gene was amplified by PCR, using the pIDT-IL2 as template with two specific primers (IL2-F and IL2-R) containing BamHI and NdeI sites. The PCR product was digested with BamHI and NdeI then inserted into an expression vector pET-His to construct a recombinant plasmid termed pET-il2 capable of expressing IL-2 under the control of T7 promoter. The recombinant plasmid pET-il2 was transformed into E. coli strain Origami(DE3) to form the Origami(DE3)/pET-il2 clone. This clone was cultured and induced with 0.5 mM IPTG over-expressed IL-2 protein as inclusion body in cytoplasm. The expressing of the target protein was confirmed by SDS-PAGE and Western Blot with anti-IL2 antibody.

TTKHCNQG, CVv 403

Xem toàn văn
  • [1] Laemmli, U.K. (1970), Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4,Nature. 227(5259): 680–685
  • [2] Jiang, T.; Zhou, C.; Ren, S. (2016), Role of IL-2 in cancer immunotherapy. 5(6): e1163462,
  • [3] Rosenberg, S.A. (2014), IL-2: The First Effective Immunotherapy for Human Cancer,The Journal of Immunology. 192(12): 5451-5458
  • [4] Globocan (2018), International Agency for Research on Cancer, accessed in May 2019,Available f-rom: https://gco.iarc.fr/today/data/factsheets/popul ations/704-viet-nam-fact-sheets.pdf
  • [5] Globocan (2018), International Agency for Research on Cancer, accessed in May 2019,Available f-rom: http://gco.iarc.fr/today/data/factsheets/popula tions/900-world-fact-sheets.pdf
  • [6] Sambrook, J.F.; Russell, D.W. (2001), Molecular Cloning, A laboratory Manual, Third Edition,Cold Spring Habor. NewYork, 2.344 pages
  • [7] Terpe, K. (2006), Overview of bacterial expression systems for heterologous protein production: f-rom molecular and biochemical fundamentals to commercial systems,Applied Microbiology and Biotechnology. 72(2): 211-222
  • [8] Gaffen, S.L.; Liu, K.D. (2004), Overview of interleukin-2 function, production and clinical applications,Cytokine. 28(3): 109-23