BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
HỆ THỐNG THÔNG TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  22,334,443
  • Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

Vi sinh vật học

Ngô Thị Kim Hằng, Trần Nguyễn Thảo Sương, Trần Văn Hiếu(1), Nguyễn Phan Viễn Phương

Tạo dòng và biểu hiện interleukin 2 (IL-2) người tái tổ hợp trong Escherichia coli

Cloning and expressing human recombinant interleukin 2 (IL-2) in Escherichia coli

Khoa học (ĐH Cần Thơ)

2020

2B

53-58

1859-2333

E. coli, Interleukin 2, Origami, Thể vùi

E. coli, Interleukin 2, Inclusion bodies, Origami

Liệu pháp miễn dịch sử dụng interleukin 2 (IL-2) đã được FDA chấp thuận sử dụng cho việc điều trị một số bệnh ung thư và hỗ trợ điều trị HIV/AIDS. Nhằm mục tiêu sản xuất IL-2 tái tổ hợp với giá thành rẻ, đề tài được triển khai nhằm dòng hóa và biểu hiện IL-2 trong Escherichia coli. Gen il2 được khuếch đại bằng phương pháp PCR sử dụng khuôn là plasmid pIDT-IL2 với cặp mồi đặc hiệu IL2-F và IL2-R chứa vị trí nhận biết của enzyme BamHI và NdeI. Sản phẩm khuếch đại được xử lý với enzyme BamHI và NdeI và chèn vào vector biểu hiện pET-His tạo nên plasmid tái tổ hợp pET-il2. Plasmid pET-il2 được biến nạp vào E. coli Origami(DE3) tạo nên dòng tái tổ hợp Origami(DE3)/pET-il2. Dòng tế bào này khi được cảm ứng biểu hiện bằng 0,5 mM IPTG đã tạo protein IL-2 biểu hiện vượt mức ở dạng thể vùi trong tế bào chất. Sự biểu hiện protein mục tiêu được kiểm chứng bằng SDS-PAGE và lai Western với kháng thể kháng protein IL-2.

Immunotherapy using interleukin 2 (IL-2) was approved by FDA for the treatment of some solid tumors and for the combination with AIDS/HIV’s HAART. In order to produce recombinant interleukin 2 with low price, the project was initiated to clone and express IL-2 in Escherichia coli. The il2 gene was amplified by PCR, using the pIDT-IL2 as template with two specific primers (IL2-F and IL2-R) containing BamHI and NdeI sites. The PCR product was digested with BamHI and NdeI then inserted into an expression vector pET-His to construct a recombinant plasmid termed pET-il2 capable of expressing IL-2 under the control of T7 promoter. The recombinant plasmid pET-il2 was transformed into E. coli strain Origami(DE3) to form the Origami(DE3)/pET-il2 clone. This clone was cultured and induced with 0.5 mM IPTG over-expressed IL-2 protein as inclusion body in cytoplasm. The expressing of the target protein was confirmed by SDS-PAGE and Western Blot with anti-IL2 antibody.

TTKHCNQG, CVv 403

Xem toàn văn
  • [1] Laemmli, U.K. (1970), Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4,Nature. 227(5259): 680–685
  • [2] Jiang, T.; Zhou, C.; Ren, S. (2016), Role of IL-2 in cancer immunotherapy. 5(6): e1163462,
  • [3] Rosenberg, S.A. (2014), IL-2: The First Effective Immunotherapy for Human Cancer,The Journal of Immunology. 192(12): 5451-5458
  • [4] Globocan (2018), International Agency for Research on Cancer, accessed in May 2019,Available f-rom: https://gco.iarc.fr/today/data/factsheets/popul ations/704-viet-nam-fact-sheets.pdf
  • [5] Globocan (2018), International Agency for Research on Cancer, accessed in May 2019,Available f-rom: http://gco.iarc.fr/today/data/factsheets/popula tions/900-world-fact-sheets.pdf
  • [6] Sambrook, J.F.; Russell, D.W. (2001), Molecular Cloning, A laboratory Manual, Third Edition,Cold Spring Habor. NewYork, 2.344 pages
  • [7] Terpe, K. (2006), Overview of bacterial expression systems for heterologous protein production: f-rom molecular and biochemical fundamentals to commercial systems,Applied Microbiology and Biotechnology. 72(2): 211-222
  • [8] Gaffen, S.L.; Liu, K.D. (2004), Overview of interleukin-2 function, production and clinical applications,Cytokine. 28(3): 109-23