BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
HỆ THỐNG THÔNG TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  20,087,464
  • Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

Khoa học kỹ thuật và công nghệ

BB

Đào Thị Hà Thanh(2), Dương Như Ngọc, Nguyễn Hoài Nam, Nguyễn Đức Trường, Nguyễn Thị Lan Anh, Đỗ Thị Thu Thuý, Đoàn Hữu Hoàn, Nguyễn Thị Bích Thuỷ, Đỗ Thị Thu Thúy(1)

Nghiên cứu thiết lập Nested- PCR ứng dụng trong chẩn đoán bệnh tiên mao trùng gây bởi loài Trypanosoma evansi trên ngựa

Study on setting up a nested PCR applying in diagnosis of Trypanosoma evansi in horses

Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y

2024

1

77

Trypanosoma evansi, loài ký sinh trùng đường máu gây bệnh tiên mao trùng (TMT) cho các loài động vật nhai lại, ngựa và con người tại Việt Nam. Nhiều phương pháp chẩn đoán phát hiện T. evansi như tiêm máu ngựa nhiễm hoặc không nhiễm bệnh này vào chuột nhắt trắng, nhuộm giemsa, ELISA, dot-ELISA, PCR cho đến nay đã được phát triển và sử dụng. Tuy nhiên, do đặc tính luôn biến đổi kháng nguyên bề mặt của các loài TMT nên mỗi phương pháp chẩn đoán đều có những hạn chế nhất định. Nested PCR (nPCR) có thể khắc phục được nhược điểm của các phương pháp chẩn đoán T. evansi trước đây. Để thiết lập phản ứng nPCR chẩn đoán phát hiện T. evansi, hai cặp mồi đặc hiệu NTE-F1/NTE-R1 và NTE-F2/ NTE-R2 nhân gen VSG của loài T. evansi đã được thiết kế. Hai cặp mồi thiết kế này đã được kiểm tra độ gắn mồi chính xác, xác định nhiệt độ gắn mồi tối ưu (570C ở PCR vòng 1; và 580C ở nested PCR), và xác định số vòng khuếch đại tối thiểu (Cycle Threshold, Ct = 35 vòng). Phản ứng nPCR đã được thiết lập chu trình nhiệt, xác định độ nhạy (100%) và độ đặc hiệu (100%); và được ứng dụng chẩn đoán phát hiện loài T. evansi thành công cho 100 mẫu máu ngựa. Chỉ số tương đồng của kết quả chẩn đoán giữa phản ứng nPCR thiết lập và phương pháp tiêm chuột nhắt trắng là 98% (Kappa = 0,95; p < 0,0001).

Trypanosoma evansi (T. evansi), a haemoparasite causes trypanosomiasis for ruminants, horses, and humans in Viet Nam. Many disagnostic methods, such as: injecting horse blood into the white mice, giemsa staining, ELISA, dot-ELISA, PCR have been developed and applied so far for detecting of T. evansi. However, due to the change of its antigen namely the variant surface glycoprotein (VSG), those developed diagnostic methods have certain limitations. The nested PCR (nPCR) could overcome the disadvantages of previous methods of T. evansi detection. To establish a nPCR to detect T. evansi, two pairs of specific primers NTE-F1/NTE-R1 and NTE-F2/NTE-R2 (20 nucleotides each) amplifying the VSG gene of T. evansi were designed. These two designed primer pairs were tested for correct primer binding. The optimal annealing temperature of designed primers were detemined (570C in round 1 PCR; 580C in nested PCR). And the cycle threshold (Ct) of the nPCR was (Ct = 35). The nPCR was thermally programmed. The sensitivity and specificity of the nPCR were both 100%. The established nPCR reaction was successfully applied to diagnose T.evansi species for 100 horse blood samples. The similarity level of diagnostic results between nPCR and mice innocular diagnostic method was 98% (Kappa = 0.95; p < 0.0001).

Xem toàn văn