Salmonella là tác nhân gây nên hiện tượng nhiễm độc thức ăn ở người. Tác nhân gây bệnh chủ yếu ở nước ta là Salmonella enteritidis. Bài nêu kết quả phân lập và biểu hiện gen gm2 mã hoá epitope kháng nguyên H:g,m của Salmonella enteritidis trong vi khuẩn E. coli BL21. Trước tiên, gen gm2 được nhân lên bằng PCR, sử dụng cặp mồi đặc hiệu để nhân gen này từ genome của vi khuẩn Salmonella enteritidis. Hai trình tự mồi được thiết kế thêm điểm cắt dành cho enzyme hạn chế NcoI và XhoI ở hai đầu để thuận lợi cho việc thiết kế vector biểu hiện. Sản phẩm PCR được gắn trực tiếp vào vector tách dòng pCR 2.1, chọn lọc các dòng tái tổ hợp coa mang gen. Những dòng tái tổ hợp được đặt tên là pCR gm2. Tiếp theo, đoạn DNA NcoI và XhoI trong vector pCR gm2 được thu lại bằng cách cắt với các enzyme NcoI và XhoI. Đoạn gen này sẽ được gắn vào vector biểu hiện pET22b (+), biến nạp vào E. coli DH5anpha, chọn lọc các thể tái tổ hợp. Các dòng tái tổ hợp được đặt tên là pET gm2. Các vector tái tổ hợp được biến nạp vào tế bào biểu hiện E.coli BL21, tiến hành biểu hiện các protein tái tổ hợp. Các kết quả thu được cho thấy gen gm2 hoạt động tốt dưới sự điều khiển của promoter Lac, được kiểm soát chặt chẽ bởi chất cảm ứng IPTG trong tế bào biểu hiện E.coli BL21
Lọc theo danh mục
Lượt truy cập :
22,411,148
Xem toàn văn