Vai trò của histidine ở vị trí 295 (His295) trong enzyme epoxide hydrolase ở hạt đậu tương

Chỉ số đề mục

31.27.17

Lĩnh vực nghiên cứu

Hoá sinh; phương pháp nghiên cứu hoá sinh

Dạng tài liệu

Tác giả

Nghiêm Ngọc Minh, Chikafusa Fukazawa, Hoàng Minh Tạo⁽¹⁾

Nhan đề

Vai trò của histidine ở vị trí 295 (His295) trong enzyme epoxide hydrolase ở hạt đậu tương

Nhan đề tiếng anh

Nguồn trích

TC Công nghệ Sinh học

Năm xuất bản

2003

Số

1

Trang

71-78

ISSN

Từ khóa

Đậu tương, Histiđin, Enzym, Epoxy hyđrolaza

Từ khóa tiếng anh

Tóm tắt

Để nghiên cứu vai trò của histidine ở vị trí 295 (His295) trong trung tâm xúc tác của EH ở hạt đậu tương, đã tiến hành tạo những gen EH đột biến có sự thay đổi ở vị trí His295. Sáu primer đột biến ở vị trí His295 (H295Q, H295R, H295D, H295F, H295N và H295Y) và 2 primer EH-Star-Sense 2, EH-End-Anti 2 đã được tổng hợp dựa trên trình tự cDNA mã hoá cho enzyme EH ở hạt đậu tương. Sử dụng những primer này, 6 gen EH đột biến đã được tạo ra nhờ kỹ thuật PCR và những gen đột biến này đã được biểu hiện thành công trong E.coli BL21 (DE3) sử dụng vector biểu hiện pRSET cùng với vector pKY260. Sự có mặt của vector pKY260 đã hỗ trợ cho việc biểu hiện ra dạng EH hoà tan. Sáu enzyme EH đột biến đã được làm sạch qua các bước xử lý nhiệt (55oC), tủa bằng 45 NH4SO4, bão hoà và cho qua cột sephacryl-200. Kết quả xác định hoạt tính enzyme cho thấy tất cả các enzyme đột biến đều mất hoạt tính. Điều này có thể nói histidine ở vị trí 295 trong enzyme EH ở hạt đậu tương đã có vai trò nhất định trong trung tâm xúc tác của enzyme này

Tóm tắt tiếng anh

Kí hiệu kho

TTTTKHCNQG, CVv 262

File toàn văn

Xem toàn văn