Đánh giá mức độ tăng biểu hiện protein màng Benchwarmer kiểu dại và đột biến E164K được chuyển nhiễm ở tế bào nuôi cấy

Chỉ số đề mục

Lĩnh vực nghiên cứu

Công nghệ gen; nhân dòng vật nuôi;

Dạng tài liệu

Tác giả

Vũ Minh Thiết⁽¹⁾, Nguyễn Hoàng Danh, Đinh Hải Ngân

Nhan đề

Đánh giá mức độ tăng biểu hiện protein màng Benchwarmer kiểu dại và đột biến E164K được chuyển nhiễm ở tế bào nuôi cấy

Nhan đề tiếng anh

Transient overexpression levels of the wild type and the E164K haboring Benchwarmer protein in HEK293 cell

Nguồn trích

Tạp chí Khoa học và Công nghệ (Đại học Nguyễn Tất Thành)

Năm xuất bản

2021

Số

15

Trang

37-42

ISSN

2615-9015

Từ khóa

Benchwarmer, đột biến E164K, protein vận chuyển màng, biểu hiện tạm thời

Từ khóa tiếng anh

Benchwarmer, mutation E164K, lysosomal membrane protein, transient expression

Tóm tắt

Gen Benchwarmer (BNCH) mã hóa cho protein xuyên màng thuộc họ protein vận chuyển Major Facilitator Superfamily được tìm thấy trong lysosome ở mọi tế bào động vật. Các đột biến gen BNCH gây kiểu hình bất lợi như thoái hóa thần kinh, làm ngắn vòng đời và lão hóa sớm ở nhiều sinh vật mô hình. Tuy nhiên chức năng và cơ chất của protein BNCH trên màng lysosome vẫn chưa được mô tả. Để tìm hiểu chức năng của protein này, chúng tôi đã tạo dòng plasmid mang gen mã hóa BNCH hoang dại ở người và plasmid mang BNCH chứa đột biến mất chức năng E164K. Hai plasmid trên được chuyển nhiễm vào các tế bào HEK293 để tạo hai dòng tế bào tăng cường biểu hiện protein BNCH hoang dại và BNCH đột biến E164K, làm cơ sở để phát triển mô hình nghiên cứu xác định chức năng phân tử và cơ chất vận chuyển của BNCH. Các plasmid tái tổ hợp được đưa vào tế bào HEK293 bằng kĩ thuật chuyển nhiễm lipoplex và mức độ biểu hiện protein được kiểm tra bằng Western Blot. Kết quả cho thấy cả hai biến thể này của BCNH được tăng cường biểu hiện thành công và có mức độ biểu hiện tương đương nhau trong dòng tế bào HEK293. Đây là cơ sở quan trọng để chúng tôi sử dụng hai dòng tế bào này làm mô hình nghiên cứu chức năng của BNCH trong tương lai.

Tóm tắt tiếng anh

Human Benchwarmer (BNCH) encodes a transmembrane helices protein belonging to the Major Facilitator Superfamily found in lysosomes. Genetic abrogations of BNCH caused neurodegeneration, accumulation of substances in lysosomes, shorter lifespan, and early onset of senescence in fruit flies, zebrafish, and roundworms. However, the molecular function of BNCH protein remains to be identified. To develop a cell assay to characterize the molecular function of the protein, we have cloned the coding sequences of the wild type BNCH and the BNCH carrying E164K loss of function mutation in the mammalian expression vector pcDNA 3.1 and expressed both vectors in the HEK293 cell line. The mutant E164 must be proved not to cause apparent changes in the expression levels and the location of the mutated BNCH thereby it can be used as a counter control in a cellular assay to assess the function of BNCH. In this study, we used lipoplexes to transfect and transiently express the WT BNCH and E164K BNCH in HEK293 cell line. The protein expression levels were evaluated by Western Blot by using the specific antibody. Our results show that both BNCH isoforms were successfully transfected and equally overexpressed in the HEK293 cells. Therefore, the cell lines will serve as important tool to investigate the molecular role of BCHN in the further study

Kí hiệu kho

TTKHCNQG, CVv 503

File toàn văn

Xem toàn văn