Nghiên cứu để tạo bộ sinh phẩm (kit) chẩn đoán nhanh mẫu bị nhiễm Salmonella dựa trên cơ sở kháng nguyên tái tổ hợp. Bài công bố kết quả phân lập và biểu hiện gen fljB2 mã hoá kháng nguyên H:1,2 của Salmonella typhimurium trong vi khuẩn E. coli BL21. Trước tiên gen fljB2 được nhân lên bằng kỹ thuật PCR nhờ sử dụng cặp mồi đặc hiệu, được thiết kế để nhân gen này từ genome của vi khuẩn Salmonella typhimurium. Hai trình tự mồi được thiết kế thêm điểm cắt dành cho enzyme hạn chế NcoI và XhoI ở hai đầu để thuận lợi cho việc đưa đoạn gen này vào vector biểu hiện. Sau đó, sản phẩm PCR được gắn trực tiếp vào vector tách dòng pCR2.1 chọn lọc các dòng tái tổ hợp coa mang gen. Những dòng tái tổ hợp được đặt tên là pCRfljB2. Tiếp theo, đoạn DNA NcoI-XhoI nằm trong vector pCRfljB2 được thu lại bằng cách cắt bằng enzyme hạn chế NcoI và XhoI. Đoạn gen này sẽ được gắn vào vector biểu hiện pET22b (+), biến nạp vào E. coli DH5anpha, chọn lọc các thể tái tổ hợp. Các dòng tái tổ hợp được đặt tên là pETfljB2. Các plasmid tái tổ hợp được biến nạp vào tế bào biểu hiện E. coli BL21, tiến hành biểu hiện các protein tái tổ hợp. Kết quả thu được đã cho thấy rằng, gen fljB2 được hoạt động tốt dưới sự điều khiển của promoter Lac, được cảm ứng bởi IPTG trong tế bào biểu hiện E.coli BL21
Lọc theo danh mục
Lượt truy cập :
22,411,148
Xem toàn văn