BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
HỆ THỐNG THÔNG TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  22,431,756
  • Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

Công nghệ sinh học

Phạm Thị Hằng, Nguyễn Thùy Linh, Lê Bắc Việt, Nguyễn Thị Kim Liên(2), Lê Thị Thu Hiền, Huỳnh Thị Thu Huệ(1)

Chuyển gen cải biến gdhA có nguồn gốc Escherichia coli vào cây thuốc lá Nicotiana tabacum

Transformation of Escherichia coli modified gdhA gene into Nicotiana tabacum

Sinh học

2019

1

69-82

0866-7160

Chuyển gen, Cây thuốc lá, Gen gdhA, Cải biến gen

Escherichia coli, Genetic transformation, gdhA gene, Tobacco

Phân lập gen gdhA từ chủng vi khuẩn E. coli JM109, tạo dòng và xác định trình tự gen gdhA để tìm sự khác biệt về gen trong chủng hiện có. Gen gdhA sau khi cải biến được ghép nối với promoter CaMV 35S và 35S terminator trong vector trung gian pRTRA 7/3 để tạo cấu trúc biểu hiện 35SgdhA35S. Cấu trúc này đã được chuyển vào vector pCAMBIA1300 tạo nên vector biểu hiện thực vật mang gen gdhA và biến nạp vector vào tế bào vi khuẩn A. tumefaciens chủng EHA105. Phân tích sự có mặt của gen trong 20 dòng cây thuốc lá chuyển gen bằng PCR và RT-PCR cho thấy 2 trong số 20 dòng thuốc lá chuyển gen có mang gen gdhA hoạt động ở mức độ phiên mã tạo mRNA.

The gdhA gene from Escherichia coli encoding a NADPH-GDH was expressed in tobacco plants exhibited high growth performance and enhanced herbicide resistance as well as drought tolerance. In addition, the gdhA gene when expressed in maize plants could increase productivity because of improving stresstolerance. In this study, we isolated and analyzed a gdhA gene from the E. coli strain JM109. Then, the E. coli derived-gdhA sequence was modified by using OptimumGene™ software for plant compatibility. The optimized gdhA gene was inserted into an expression cassette containing the CaMV 35S promoter and the 35S terminator of the pRTRA7/3 vector. The 35SgdhA35S construct was ligated into the plant expression plasmid pCAMBIA1300 which then introduced into the A. tumefaciens strain EHA105. In order to examine the expression of the gdhA gene, we created gdhA-transgenic plants via Agrobacterium-mediated transformation into N. tabacum K326. The PCR analysis showed that two out of 20 plants were positive to the presence of the gdhA gene. The RT-PCR experiment also revealed that gdhA was expressed at transcriptional level. These results suggested that the gdhA expression construction can be transformed into other crops such as maize.

TTKHCNQG, CVv 27

Xem toàn văn
  • [1] Loulakakis K. A.; Primikirios N. I.; Nikolantonakis M. A.; Roubelakis Angelakis K. A. (2002), Immunoc-haracterization of Vitis vinifera L. ferredoxin-dependent glutamate synthase, and its spatial and temporal changes during leaf development,Planta, 215: 630–638.
  • [2] Lindsey K.; Gallois P. (1990), Transformation of sugarbeet (Beta vulgaris L.) by Agrobacterium tumefaciens,J. Exp. Bot., 41: 529–536.
  • [3] Lam H. M.; Hsieh M. H.; Coruzzi G. (1998), Reciprocal regulation of distinct asparagine synthetase genes by light and metabolites in Arabidopsis thaliana,Plant J., 16: 345–353.
  • [4] Jefferson R. A.; Klass M.; Wolf N.; Hirsh D. (1987), Expression of chimeric genes in Caenorhabditis elegans,J. Mol. Biol., 193(1): 41–46
  • [5] Fry J.; Barnason A.; Horsch R.B. (1987), Transformation of Brassica napus with Agrobacterium tumefaciens-based vectors,Plant Cell Reports, 6: 321–325.
  • [6] Forde B. G.; Lea P. J. (2007), Glutamate in plants: metabolism, regulation, and signalling,J Exp Bot., 58(9): 2339–2358.
  • [7] Belkheiri O.; Mulas M. (2013), The effects of salt stress on growth, water relations and ion accumulation in two halophyte Atriplex species,Environmental and Experimental Botany, 86: 17–28.
  • [8] Battraw M. J.; Hall T. C. (1990), Histochemical analysis of CaMV 35S promoter-β-glucuronidase gene expression in transgenic rice plants,Plant Molecular Biology, 15: 527–538.
  • [9] Aubert D.; Chen L.; Moon Y. H.; Martin D; Castle L. A.; Yang C. H.; Sung Z. R. (2001), EMF1, a novel protein involved in the control of shoot architecture and flowering in Arabidopsis,The Plant Cell, 13(8): 1865–1875.
  • [10] Ameziane R.; Bernhard K.; Lightfoot D. (2000), Expression of the bacterial gdhA gene encoding a NADPH glutamate dehydrogenase in tobacco affects plant growth and development,Plant and Soil, 221(1): 47–57.
  • [11] Allen G. Good; Steven T. Zaplachinski (1994), The effects of drought stress on free amino acid accumulation and protein synthesis in Brassica napus,Physiologia Plantarum, 90: 9 –14.
  • [12] Abdullah A. Y.; Obeidat B. S.; Muwalla M. M.; Matarneh S. K.; Ishmais M. A. A. (2011), Growth performance, carcass and meat c-haracteristics of black goat kids fed sesame hulls and Prosopis juliflora pods,Asian-Aust. J. Anim. Sci., 24(9): 1217– 1226.