BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
HỆ THỐNG THÔNG TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  23,525,915
  • Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

Hoá sinh; phương pháp nghiên cứu hoá sinh

Lê Dương Vương, Lê Thị Tường Vy, Phan Thị Phượng Trang(1), Nguyễn Đức Hoàng

Tinh chế và hoạt tính của Human rhinovirus 3C protease dung hợp với GST-tag ở đầu N và His-Tag ở đầu C được biểu hiện trong Escherichia coli.

Purification, and activity of human Rhinovirus 3C protease fused with N-terminal GST-tag and C-terminal His-tag (GST-HRV3C-His) expressed in Escherichia coli

Tạp chí Khoa học ( Đại học Sư phạm TP. Hồ Chí Minh)

2019

3

162-173

1859-3100

Tinh sạch, Human rhinovirus 3C protease, GST-HRV3C-His

Rhinovirus 3C, GST-HRV3C-His, Escherichia coli

Human rhinovirus 3C protease (HRV3C) là một trong những công cụ phổ biến nhất để loại bỏ đuôi dung hợp trong quá trình tinh chế. Protease này thường được tạo ra ở dạng GST-HRV3C nhưng chưa có nghiên cứu nào về dạng dung hợp GST-HRV3C-His. Nghiên cứu này làm rõ quá trình tiến hành tinh chế GST-HRV3C-His được biểu hiện trên E. coli, kiểm tra hoạt tính và ứng dụng của nó. GST-HRV3C-His đã được thu nhận được với độ tinh sạch 86,6% (với cột tinh chế HisTrap) và 96,8% (với cột tinh chế GST). hoạt tính riêng của GST-HRV3C-His được xác định ở khoảng 4500 U/mg. protease này được ừng dụng trong quá trình tinh chế các protein khác mang trình tự nhận dạng đặc hiệu của HRV3C (LEVLFQ/GP) dựa trên đuôi dung hợp His hoặc GST.

The Human rhinovirus 3C protease (HRV3C) is one of the most effective enzymes for removing fusion tag in purification process. This protease is often produced as fusion form GSTHRV3C but there is no study about the fusion form GST-HRV3C-His. In this study, researchers conducted the purification GST-HRV3C-His expressed in E. coli,checked the activity and investigated its application. GST-HRV3C-His could be purified using His-tag column with 86.6% purity and GST column with 96.87%. The specific activity of GST-HRV3C-His was demonstrated to be about 4500 U/mg and its application in the purification of another proteins carrying HRV3Cspecific recognition sequence, LEVLFQ¯GP based on His-tag or GST-tag was also proved in this study.

TTKHCNQG, CTv 138

Xem toàn văn
  • [1] Zhao, X., Li, G., & Liang, S. (2013), Several Affinity Tags Commonly Used in Chromatographic Purification.,Journal of Analytical Methods in Chemistry, 2013. https://doi.org/10.1155/2013/581093
  • [2] Waugh, D. S. (2011), An overview of enzymatic reagents for the removal of affinity tags.,Protein Expression and Purification, 80(2), 283–293. https://doi.org/10.1016/j.pep.2011.08.005
  • [3] Watson, L., & Veeraragavan, K. (2014), Dilution-Free Protein Concentration Measurement by Absorbance at 280 nm for High Protein Concentration Samples.,BIOPHARM INTERNATIONAL, 27(2), 26-37.
  • [4] Wanga, Q. M., & Chen, S.-H. (2017), Human rhinovirus 3C protease as a potential target for the development of antiviral agents.,Current Protein & Peptide Science, 8(1), 19-27.
  • [5] Walker, P. A., Leong, L. E., Ng, P. W., Tan, S. H., Waller, S., Murphy, D., & Porter, A. G. (1994), Efficient and rapid affinity purification of proteins using recombinant fusion proteases.,Bio/Technology (Nature Publishing Company), 12(6), 601-605.
  • [6] Ullah, R., Shah, M. A., Tufail, S., Ismat, F., Imran, M., Iqbal, M.,… Rhaman, M. (2016), Activity of the Human Rhinovirus 3C Protease Studied in Various Buffers, Additives and Detergents Solutions for Recombinant Protein Production.,PLoS ONE, 11(4). https://doi.org/10.1371/journal.pone.0153436
  • [7] Phan, T., Huynh, P., Truong, T., & Nguyen, H. (2017), A Generic Protocol for Intracellular Expression of Recombinant Proteins in Bacillus subtilis.,Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.), 1586, 325–334. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-6887-9_21
  • [8] Froger, A., & Hall, J. E. (2007), Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method.,Journal of Visualized Experiments : JoVE, (6). https://doi.org/10.3791/253
  • [9] Eschenfeldt, W. H., Maltseva, N., Stols, L., Donnelly, M. I., Gu, M., Nocek, B.,… Joachimiak, A. (2010), Cleavable C-terminal His-tag vectors for structure determination.,Journal of Structural and Functional Genomics, 11(1), 31–39. https://doi.org/10.1007/s10969-010- 9082-y