BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
HỆ THỐNG THÔNG TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  23,053,549
  • Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

69

Bệnh học thuỷ sản

BB

Nguyễn Thị Huyền, Nguyễn Thị Kim Oanh, Vũ Đăng Thắng, Nguyễn Đăng Hồng Ngọc, Nguyễn Thanh Loan, Âu Xuân Khoa, Vũ Thị Lan Hương, Nguyễn Thị Thúy Mận(1), Trương Đình Hoài

Thiết lập và tối ưu hóa quy trình Realtime PCR phát triển Decapod iridescent virus 1 gây bệnh trên tôm

Establishment and Optimization of Realtime PCR Assays for Detecting Disease in Shrimp Caused by Decapod Iridescent Virus 1

Khoa học Nông nghiệp Việt Nam

2024

02

215-225

2588-1299

Realtime PCR, Thiết lập, Tối ưu, Plasmid, DIV1

Real-time PCR, Procedure establishment, Optimization, MCP and ATPase genes, Plasmids, DIV1

Nghiên cứu được thực hiện để thiết lập, tối ưu hoá quy trình realtime PCR phục vụ chẩn đoán và kiểm soát bệnh DIV1 trên tôm. Mẫu plasmid chứa hai đoạn gen đích của DIV1 là MCP và ATPase được sử dụng để thiết lập và tối ưu hoá quy trình với lượng mồi dò probe ở các nồng độ 0,1; 0,15 và 0,2μM. Độ nhạy, hiệu suất, mức độ đặc hiệu, mức độ ổn định giữa các lần xét nghiệm và kết quả đối sánh liên phòng thí nghiệm được chuẩn hoá trong và ngoài nước được sử dụng để đánh giá hiệu quả và giá trị sử dụng của quy trình. Kết quả nghiên cứu cho thấy quy trình realtime PCR ở nồng độ mồi dò 0,2μM cho thấy khả năng phát hiện tối ưu nhất. Giới hạn phát hiện của phản ứng lần lượt là 13,6 và 14,3 bản sao plasmid/phản ứng, hiệu suất lần lượt là 98,9% và 92,6%. Phản ứng có độ đặc hiệu cao (không có phản ứng với các mẫu tôm dương tính với WSSV, IHHNV, AHPND, EHP) và ổn định (CV < 15%). Kết quả nghiên cứu cho thấy hai quy trình realtime PCR sử dụng plasmid chứa gen MCP và ATPase đã được thiết lập và tối ưu hoá trong nghiên cứu này đảm bảo độ tin cậy và có thể ứng dụng để tầm soát và kiểm soát bệnh DIV1 cho các phòng thí nghiệm tại Việt Nam.

The study was conducted to establish, optimize and validate the real-time PCR assay for the detection of Decapod iridescent virus 1 (DIV1) and control of this disease in shrimp. The plasmid samples containing two target genes MCP and ATPase of DIV1 were used to establish and optimize the procedure using different probe concentrations 0.1, 0.15 and 0.2μM. The sensitivity, performance, specificity, inter-assay stability, and interlaboratory matching results from nationally and internationally standardized laboratories were used to evaluate the efficacy and validity of these real-time PCR assays. The results of real-time PCR using plasmids containing target MCP and ATPase genes at a probe concentration of 0.2μM revealed the best detection ability. The reaction detection limits were 13.6 and 14.3 plasmid copies/reaction with the efficiency at 98.9% and 92.6%, respectively. The assays exhibited high specificity (no reaction to all shrimp-positive samples for WSSV, IHHNV, AHPND, and EHP) and high stability (CV < 15%). The study results showed that two real-time PCR assays using plasmids carrying target MCP and ATPase genes of DIV1 established in this study could ensure reliability and applicability to laboratories for screening and controlling DIV1 disease in Vietnam.

TTKHCNQG, CTv 169

Xem toàn văn