Enzyme tyrosinase ngoại bào của vi khuẩn Ralstonia solanacearum được tinh sạch một phần bằng kết tủa phân đoạn ammonium sulfate kết hợp với màng Amicon để cô đặc loại muối và các phân tử <10 kDa. Ở phân đoạn ammonium sulfate 80% bão hoà, enzyme tyrosinase của R. solanacearum biểu hiện hoạt tính mạnh nhất với hoạt tính monophenolase và diphenolase khi oxy hoá 2 cơ chất L-tyrosine và L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA). So với enzyme tyrosinase của nấm mỡ Agaricus bisporus, hoạt độ và tốc độ Vmax của enzyme này từ R. solanacearum đạt tương ứng 89,5 và 86,7%. Giá trị IC50 của axit kojic với tyrosinase của A. bisporus trong phản ứng với L-tyrosine và L-DOPA tương ứng là 0,0139 và 0,0128 mM và của R. solanacearum tương ứng là 0,0181 và 0,0191 mM. Zerumbone từ gừng gió và các phân đoạn flavonoid từ lá mít, hoa hoè và đại kế đều ức chế hoạt tính của cả 2 enzyme. Phân đoạn flavonoid từ lá mít cho hiệu quả ức chế enzyme cao hơn so với phân đoạn flavonoid từ hoa hoè và đại kế. So với axit kojic, phân đoạn flavonoid từ lá mít có hiệu quả ức chế bằng 81,76% ở ngưỡng nồng độ 0,1 mg/ml, (p<0,05). Kết quả nghiên cứu ban đầu cho thấy, enzyme tyrosinase ngoại bào của vi khuẩn R. solanacearum có thể ứng dụng để sàng lọc các hợp chất tự nhiên có khả năng ức chế enzyme tyrosinase.

The crude extracellular tyrosinase enzyme of Ralstonia solanacearum is partially purified by fraction precipitation with ammonium sulfate and combined with Amicon membranes to concentrate and remove salts and molecules <10 kDa. At the fraction of 80% saturation, the tyrosinase enzyme of R. solanacearum exhibited the strongest activity with both oxidative activities of monophenolase and diphenolase in the reaction with 2 substrates L-tyrosine and L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA). Compared with the tyrosinase of the fungus Agaricus bisporus, the activity and Vmax of R. solanacearum reached 89.5 and 86.7%, respectively. The IC50 values of kojic acid with tyrosinase of A. bisporus in reaction with L-tyrosine and L-DOPA were 0.0139 and 0.0128 mM respectively and of R. solanacearum were 0.0181 and 0.0191 mM respectively. Zerumbone f-rom Zingiber zerumbet and flavonoid fractions f-rom Artocarpus heterophyllus leaves, Styphnolobium japonicum, and Cirsium japonicum inhibited the activity of both enzymes. The flavonoid fraction f-rom leaves of A. heterophyllus showed higher enzyme inhibition activity than that of S. japonicum and C. japonicum. Compared to kojic acid, the flavonoid fraction of leaves of A. heterophyllus showed an inhibitory effect of 81.76% at a concentration of 0.1 mg/ml (p<0.05). The initial results show that the extracellular tyrosinase of R. solanacearum can be applied to screen for natural compounds inhibiting tyrosinase enzymes.