HỆ THỐNG THÔNG TIN QUỐC GIA VỀ KHOA HỌC, CÔNG NGHỆ VÀ ĐỔI MỚI SÁNG TẠO
Lọc theo danh mục
liên kết website
Lượt truy cập
Lượt truy cập :
29,927,193
- Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam
76
Kỹ thuật và thiết bị y học
BB
Nguyễn Văn Thống, Ngô Quốc Đạt(2), Nguyễn Hưng Thịnh, Nguyễn Hữu Ngọc Tuấn(1)
Xây dựng kỹ thuật qPCR dùng chất huỳnh quang SYBR GREEN định lượng DNA EBV
Establishment of sybr GREEN-BASED qPCR assay for quantification epstein-barr virus
Tạp chí Y học Việt Nam (Tổng hội Y học Việt Nam)
2024
1
209-214
1859-1868
Xây dựng quy trình kỹ thuật qPCR dùng chất huỳnh quang SYBR GREEN định lượng DNA EBV. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Xây dựng plasmind chứa đoạn gen BamHI-W của EBV bằng kỹ thuật DNA tái tổ hợp. Tối ưu hóa phản ứng qPCR dùng chất huỳnh quang SYBR GREEN định lượng DNA EBV. Điều kiện phản ứng liên quan đến thể tích phản ứng, nồng độ đoạn mồi được được giảm đi so với khuyến cáo. Áp dụng qui trình kỹ thuật qPCR vừa xây dựng trên mẫu giả lập phòng thí nghiệm, ghi nhận về các tiêu chí kỹ thuật của phản ứng qPCR, độ chính xác, độ nhạy và độ đặc hiệu. Kết quả: Tạo thành công plasmid chứa đoạn gen BamHI-W của EBV được xác nhận bằng giải trình tự Sanger. Xây dựng thành công quy trình kỹ thuật qPCR dùng chất huỳnh quang SYBR GREEN bao gồm: Phản ứng qPCR ở thể tích phản ứng 10 μL với nồng độ đoạn mồi 500nM thỏa các tiêu chí kỹ thuật của phản ứng PCR. Độ chính xác cao với CV trong một ngày và ba ngày nhỏ hơn 11%, hiệu suất phản ứng E% là 95,67%, giá trị slope là -3.432, hệ số tương quan R2 là 0,999; Ngưỡng giới hạn phát hiện (LOD) của kỹ thuật qPCR là 2.104 copy/μL. Trong thí nghiệm giả lập trên mẫu plamid ghi nhận độ chính xác, độ nhạy và độ đặc hiệu là 100%. Kết luận: Xây dựng thành công quy trình quy trình kỹ thuật qPCE dùng chất huỳnh quang SYBR GREEN định lượng DNA EBV.
Establishment of SYBR GREEN-BASED qPCR to help quantitative Epstein – Barr Viruss. Method: Construction of a plasmid containing the BamHI-W gene fragment of EBV by recombinant DNA technique. Optimization of qPCR reaction using SYBR GREEN fluorescence quantification of EBV DNA. Reaction conditions related to reaction volume, primer, concentrations were reduced compared to the recommended. Applying the qPCR technical process just built on the laboratory simulation sample, recording the technical criteria of the qPCR reaction, accuracy, sensitivity, and specificity. Result: Successfully generated a plasmid containing the BamHI-W gene fragment of EBV identified by Sanger decoding. Successfully built a qPCR technique using SYBR GREEN fluorescent agent, including a qPCR reaction at a reaction volume of 10 μL with primer concentrations 500nM which was contrary to the technical specifications of the reaction. The PCR reaction had high accuracy with one-day and three-day CVs of less than 11%, an E% response efficiency of 95,67%, a value slope of -3.432, and a correlation coefficient R2 of 0,999. The limit of detection (LOD) of qPCR was 2.104 copies/ μL. In a simulated test on a definite precision recorded plasmid sample, the sensitivity and specificity were 100%. Conclusion: Successfully built a qPCR technical process using SYBR Green fluorescence to quantify EBV DNA.
TTKHCNQG, CVv 46
Xem toàn văn