THIẾT KẾ VÀ TỐI ƯU HÓA PHẢN ỨNG MULTIPLEX PCR ĐỂ PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH DANH KIỂU GEN VIRUS GÂY BỆNH DỊCH TẢ LỢN CHÂU PHI Ở VIỆT NAM

Chỉ số đề mục

Lĩnh vực nghiên cứu

Khoa học nông nghiệp

Dạng tài liệu

BB

Tác giả

Võ Thị Bích Thủy⁽¹⁾, Bùi Thùy Linh, Vũ Minh Thương, Nghiêm Ngọc Minh

Nhan đề

THIẾT KẾ VÀ TỐI ƯU HÓA PHẢN ỨNG MULTIPLEX PCR ĐỂ PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH DANH KIỂU GEN VIRUS GÂY BỆNH DỊCH TẢ LỢN CHÂU PHI Ở VIỆT NAM

Nhan đề tiếng anh

THE OPTIMIZATION PROCESS OF MULTIPLEX PCR TO DETECT AND IDENTIFY THE GENOTYPES OF AFRICAN SWINE FEVER VIRUS IN VIETNAM

Nguồn trích

Tạp chí Khoa học và Công nghệ - Đại học Thái Nguyên

Năm xuất bản

2023

Số

09

Trang

3-10

ISSN

Từ khóa

Từ khóa tiếng anh

Tóm tắt

Multiplex PCR là phương pháp sinh học phân tử nhằm khuếch đại nhiều trình tự DNA chỉ trong một phản ứng và được ứng dụng phổ biến trong nhiều nghiên cứu vì tính ưu việt của nó. Vì vậy, chúng tôi đã nghiên cứu và ứng dụng kỹ thuật Multiplex PCR để phát hiện sự có mặt của virus gây bệnh dịch tả lợn châu Phi, đồng thời định danh genotype đang lưu hành tại Việt Nam. Mục tiêu là thiết kế và tối ưu hóa phản ứng multiplex PCR làm cơ sở cho việc chế tạo một bộ kit phát hiện và định danh kiểu gen virus gây bệnh dịch tả lợn châu Phi ở Việt Nam. Kết quả đã thiết kế và tối ưu hóa thành công phản ứng multiplex PCR gồm: nồng độ Buffer 1X; dNTP 0,5 µM; 1,25 mM MgCl2; 0,05 U/µl Taq DNA polymeraza, nồng độ các mồi là 0,1 – 0,4µM (p72-F, p72-R, p72-SNP, p72-g01, p72-g02, p72-g08, p72-g09, p72-g10, p72-g23); ≥ 150 pmol/µl DNA chuẩn. Chu trình nhiệt là 95oC - 5 phút; (95oC - 30 giây; 62oC - 15 giây; 72oC - 30 giây) x 30 chu kỳ; 72oC - 7 phút. Kết quả này sẽ được sử dụng để phát triển bộ kít phát hiện và định danh virus gây bệnh dịch tả lợn châu Phi với ý nghĩa sử dụng trong ngành chăn nuôi Việt Nam.

Tóm tắt tiếng anh

Multiplex PCR is a widely used molecular biology method in many studies because of its superiority. A reaction that amplifies multiple DNA sequences in a single PCR reaction. Therefore, we have studied and applied the molecular biotechnology technique of Multiplex PCR to detect the presence of the ASF virus and identify which genotype is circulating in Vietnam. The objective is to design and optimize the multiplex PCR reaction as the basic kit for detecting and genotyping the ASF virus in Vietnam. The results showed that the multiplex PCR reaction was successfully designed and optimized, including the concentration of primers Buffer 1X; dNTP 0.5 µM; 1.25 mM MgCl2; 0.05 U/µl Taq DNA polymerase, primers 0.1 – 0.4 µM (p72-F, p72-R, p72-SNP, p72-g01, p72-g02, p72-g08, p72-g09, p72-g10, p72-g23); ≥ 150 pmol/µl DNA standard. Heat cycle is 95oC - 5 minutes; (95oC – 30 sec; 62oC – 15 sec; 72oC – 30 sec) x 30 cycles; 72oC - 7 minutes. This result can be used to develop a kit to detect and identify the ASF virus, which is meant for use in the Vietnamese livestock industry.

Kí hiệu kho

File toàn văn

Xem toàn văn