Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  20,783,243
  • Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

Kỹ thuật hoá dược

Phạm Anh Thùy Dương, Phạm Thế Tùng(1), Trần Thị Quỳnh Trang, Lưu Thu Phương, Võ Thị Thương Lan(2)

Xây dựng đối chứng chuẩn cho kĩ thuật qMSP xác định tỉ lệ methyl hóa promoter LINE-1

Development of a Standard Control for qMSP to Analyze the Methylation Status of LINE-1

Tạp chí Khoa học Y dược – Đại học Quốc gia Hà Nội

2022

01

65-73

2615-9309

Sàng lọc sớm ung thư là một khía cạnh quan trọng của chăm sóc sức khỏe toàn diện, đóng góp một phần đáng kể trong việc làm giảm nguy cơ tử vong và chi phí điều trị cho người bệnh. Tìm ra các dấu ấn ung thư mới với độ nhạy và độ đặc hiệu cao đang là xu hướng trong hoạt động nghiên cứu ở Việt Nam cũng như trên thế giới. Các trình tự lặp phân bố trong hệ gen (Long interspersed element-1, LINE-1) là DNA lặp lại chiếm tỉ lệ lớn và có khả năng vận động đến các vị trí khác nhau trong hệ gen (genome). Sự vận động của LINE-1 được kiểm soát thông qua cơ chế methyl hóa DNA (phức CpG được gắn thêm nhóm -CH3), theo đó LINE-1 bị methyl hóa cao ở tế bào bình thường. Tuy nhiên, trong một số loại ung thư như phổi, vú, dạ dày, gan, trực tràng… sự thay đổi tình trạng methyl hóa LINE-1 đã được ghi nhận. Để nghiên cứu tình trạng methyl hóa của trình tự LINE-1, chúng tôi sử dụng kĩ thuật real-time khuếch đại đặc hiệu methyl. Kĩ thuật này cần có đối chứng chuẩn để định lượng tỉ lệ methyl hóa. Từ DNA methyl hóa thương mại, chúng tôi nhân dòng phân tử (tách dòng) hai vùng trong promoter của LINE-1 tương ứng với hai trình tự tham chiếu không chứa CpG và trình tự có 6 vị trí CpG bị methyl hóa. Kết quả chúng tôi đã tạo ra được hai plasmid tái tổ hợp pREF-LINE1 và pMe-LINE1. Các plasmid được mở vòng dạng thẳng, phối trộn theo tỉ lệ 10% methyl hóa và có thể được sử dụng làm đối chứng chuẩn để phân tích các mẫu bệnh phẩm.

Cancer screening is an important aspect of comprehensive health care, making a significant contribution to reducing the risk of death and the cost of treating patients. Finding new tumor markers with high sensitivity and specificity is a trend in the research activities in Vietnam as well as all over the world. Long interspersed element-1 (LINE-1), a large proportion of repeating DNA, is transposable to different positions in the genome. LINE-1 activity is controlled through DNA methylation (the CpG is attached with CH3), whereby LINE-1 is highly methylated in normal cells. However, in some types of cancer such as lung, breast, stomach, liver, rectum... changes in the methylation status LINE-1 have been noticed. To study the methylation status of the LINE-1 sequence, we used a quantitative methyl-specific PCR technique. This method requires a standard calibrator to quantify the rate of methylation. From the commercial methylated DNA (CpG Methylated Human Genomic DNA, Promega), we cloned two regions of the LINE-1 promoter corresponding to a reference sequence and an investigated one (target sequence) which are bisulfite transformed. As a result, we have created two recombinant plasmids, pRef-LINE1 and pMe-LINE1. The plasmids were mixed at 10% of methylation and could be used as a standard control for analyzing the DNA methylation of specimens from patients.

TTKHCNQG, CTv 182