Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang và phân tích hình ảnh nội hàm cao trong đánh giá hoạt tính ức chế chuyển vị yếu tố nhân NF-κB

Chỉ số đề mục

Lĩnh vực nghiên cứu

Công nghệ sinh học liên quan đến y học, y tế

Dạng tài liệu

Tác giả

Đỗ Hữu Nghị⁽¹⁾, Nguyễn Xuân Vũ, Nguyễn Xuân Thành, Lưu Văn Chính, Lê Mai Hương⁽²⁾

Nhan đề

Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang và phân tích hình ảnh nội hàm cao trong đánh giá hoạt tính ức chế chuyển vị yếu tố nhân NF-κB

Nhan đề tiếng anh

Nguồn trích

Tạp chí Công nghệ Sinh học - Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam

Năm xuất bản

2020

Số

1

Trang

157-165

ISSN

1811-4989

Từ khóa

Miễn dịch huỳnh quang, Ức chế chuyển vị, Ung thư, Mã hóa, Nhân NF-κB

Từ khóa tiếng anh

Tóm tắt

Yếu tố nhân kappa B hay NF-κB là yếu tố phiên mã thiết yếu kiểm soát quá trình biểu hiện gen mã hóa của các cytokine tiền viêm trong quá trình sinh lý bệnh viêm và ung thư. Trong nghiên cứu này trình bày ứng dụng kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang kết hợp phân tích hình ảnh nội hàm cao để phát hiện và định lượng sự chuyển vị của tiểu đơn vị NF-κB p65 liên kết protein huỳnh quang xanh (green fluorescent protein, GFP) kích hoạt bởi cytokine trên dòng tế bào ung thư cổ tử cung HeLa. Sau khi nghiên cứu các điều kiện thích hợp, hình ảnh thu được đủ chất lượng phân tích và đảm bảo độ tin cậy của phép thử khi hệ số Z' tính theo tỷ lệ protein trong nhân (Nu) và tế bào chất (Cyto) được xác định lần lượt là 0,70 đối với Nuc-Cyto và 0,73 cho Nuc/Cyto. Cụ thể thử nghiệm với mẫu hợp chất zerumbone (SHTN-4, nồng độ 25 µg/mL) có thể hiện hoạt tính ức chế NF-κB qua xác định lượng p65-GFP trong bào tương cao hơn đáng kể (82 %) so với đối chứng (19,4 %) khi xử lý tế bào HeLa với chất cảm ứng IL-1 (10 ng/mL) trong 1 giờ. Kết quả nghiên cứu là cơ sở để xây dựng quy trình định lượng protein nội bào trong sàng lọc các hoạt chất trên đích phân tử sinh học liên quan hoạt tính kháng viêm và ung thư ở điều kiện nghiên cứu trong nước.

Tóm tắt tiếng anh

Kí hiệu kho

TTKHCNQG, CVv 262

File toàn văn

Xem toàn văn

Tài liệu tham khảo

[1] Sen R, Baltimore D (1986), Inducibility of kappa immunoglobulin enhancer-binding protein Nf-kappa B by a posttranslational mechanism.,Cell 47: 921-928.
[2] Rahman HS, Rasedee A, C-hartrand MS, Othmana MH, Yeap S-K, Namvar F (2014), Zerumbone induces G2/M cell cycle arrest and apoptosis via mitochondrial pathway in Jurkat cell line.,Nat Prod Commun 9: 1237-1242.
[3] Maguire O, Collins C, O'Loughlin K, Miecznikowski J, Minderman H (2011), Quantifying nuclear p65 as a parameter for NF-κB activation: Correlation between ImageStream Cytometry, Microscopy and Western blot.,Cytometry A. 79: 461-469.
[4] Liu T, Zhang L, Joo D, Sun S-C (2017), NF-κB signaling in inflammation.,Signal Transduct Target Ther 2, e17023; doi:17010.11038/sigtrans. 12017.17023.
[5] Đỗ Thị Thanh Huyền, Trần Thị Thùy Anh, Nguyễn Thị Hồng Vân, Nguyễn Văn Sáng (2017), Tách dòng, biểu hiện và tinh sạch nhân tố phiên mã NF-κB p50 của người trong tế bào vật chủ E. coli.,Tạp chí Khoa học Tự nhiên-Công nghệ (ĐHQGHN) 33: 299-304.
[6] Hoesel B, Schmid JA (2013), The complexity of NFkappaB signaling in inflammation and cancer.,Mol Cancer 12:86.
[7] Harlow E, Lane D (2006), Fixing attached cells in paraformaldehyde.,CSH Protoc 3: 4294-4296.
[8] Du K, Wu J, Pan A, Li D, Cui L, Peng C (2019), Cyclic enzymatic amplification method for highly sensitive detectionof nuclear factor-kappa B.,Analytica Chimica Acta 1068: 80-86.
[9] Ding G, Fischer P, Boltz R, Schmidt J, Colaianne J, Gough A (1998), C-haracterization and quantitation of NF-KB nuclear translocation induced by interleukin1 and tumor necrosis factor-α: development and use of a hight capacity fluorescence cytometric system.,Biol Chem 273: 28897-28905.
[10] Bartfeld S, Hess S, Bauer B, Machuy N, Ogilvie L-A, Schuchhardt J, Meyer T-F (2010), High-throughput and single-cell imaging of NF-kB oscillations using monoclonal cell lines.,BMC Cell Biology 11: 1471- 2121.