Nghiên cứu chỉnh sửa gen bằng hệ thống CRISPR/Cas9 trong dòng tế bào ung thư

Chỉ số đề mục

Lĩnh vực nghiên cứu

Công nghệ liên quan đến xác định chức năng của ADN, protein, enzym

Dạng tài liệu

Tác giả

Vũ Thị Hà⁽¹⁾, Bùi Tường An, Đoàn Thị Kim Phượng

Nhan đề

Nghiên cứu chỉnh sửa gen bằng hệ thống CRISPR/Cas9 trong dòng tế bào ung thư

Nhan đề tiếng anh

Nguồn trích

Tạp chí Nghiên cứu y học (Đại học Y Hà Nội)

Năm xuất bản

2020

Số

126

Trang

1-6

ISSN

0868-202X

Từ khóa

CRISPR/Cas9, Liệu pháp, Gen, Tế bào, Ung thư

Từ khóa tiếng anh

Tóm tắt

Hệ thống CRISPR/Cas9 là một trong những công cụ đem lại hiệu quả chỉnh sửa gen cao và có triển vọng trong ứng dụng lâm sàng. Với mục tiêu chỉnh sửa gen RAPTOR và Atg5 trên dòng tế bào bạch cầu mạn tính dòng tủy K562 và tế bào ung thư não TGS04 bằng hệ thống CRISPR/Cas9, chúng tôi thiết kế hệ thống CRISPR/Cas9 bằng cách chèn đoạn trình tự đích vào plasmid PX330. Plasmid này được đưa vào tế bào đích bằng xung điện. Để đánh giá hiệu quả của quá trình chỉnh sửa gen chúng tôi sử dụng các kỹ thuật PCR, giải trình tự gen và Western blotting. Kết quả cho thấy CRISPR/Cas9 được thiết kế đã gây xóa exon3 trên gen RAPTOR; gây đột biến mất đoạn gen Atg5 dẫn đến tăng rõ rệt mức độ biểu hiện của protein LC3I và giảm đáng kể mức độ biểu hiện của protein LC3II. Nghiên cứu của chúng tôi đã chỉ ra rằng hệ thống CRISPR/Cas9 chỉnh sửa được các gen đích dẫn đến sự biến đổi protein và các sản phẩm trong con đường hoạt hóa gen.

Tóm tắt tiếng anh

Kí hiệu kho

TTKHCNQG, CVv 251

File toàn văn

Xem toàn văn

Tài liệu tham khảo

[1] Platt RJ, Chen S, Zhou Y, et al. (2014), CRISPR-Cas9 knockin mice for genome editing and cancer modeling.,Cell. 2014;159(2):440455.
[2] Ghosh J, Kapur R. (2016), Regulation of Hematopoietic Stem Cell Self-Renewal and Leukemia Maintenance by the PI3K-mTORC1 Pathway.,Curr Stem Cell Rep. 2016;2(4):368378.
[3] Vu HT, Kobayashi M, Hegazy AM, et al. (2018), Autophagy inhibition synergizes with calcium mobilization to achieve efficient therapy of malignant gliomas.,Cancer Sci. 2018;109(8):2497-2508.
[4] Earwaker P, Anderson C, Willenbrock F, Harris AL, Protheroe AS, Macaulay VM. (2018), RAPTOR up-regulation contributes to resistance of renal cancer cells to PI3K-mTOR inhibition.,PloS One. 2018;13(2):e0191890-e0191890
[5] Ikushima H, Todo T, Ino Y, Takahashi M, Miyazawa K, Miyazono K. (2009), Autocrine TGF-β Signaling Maintains Tumorigenicity of GliomaInitiating Cells through Sry-Related HMG-Box Factors.,Cell Stem Cell. 2009;5(5):504-514.
[6] Wang T, Birsoy K, Hughes NW, et al. (2015), Identification and c-haracterization of essential genes in the human genome.,Science. 2015;350(6264):1096.
[7] Xue W, Chen S, Yin H, et al. (2014), CRISPRmediated direct mutation of cancer genes in the mouse liver.,Nature. 2014;514(7522):380-384.
[8] Heckl D, Kowalczyk MS, Yudovich D, et al. (2014), Generation of mouse models of myeloid malignancy with combinatorial genetic lesions using CRISPR-Cas9 genome editing.,Nat Biotechnol. 2014;32(9):941-946.
[9] Cong L, Ran FA, Cox D, et al. (2013), Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems.,Science. 2013;339(6121):819-823.
[10] Doudna JA, C-harpentier E. (2014), The new frontier of genome engineering with CRISPRCas9.,Science. 2014;346(6213):1258096
[11] Gaj T, Sirk SJ, Shui S-L, Liu J. (2016), Genome-Editing Technologies: Principles and Applications.,Cold Spring Harb Perspect Biol. 2016;8(12):a023754.