BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
HỆ THỐNG THÔNG TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  21,750,164
  • Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

Kỹ thuật và thiết bị y học

Nguyễn Thị Hồng Loan, Phùng Bảo Khánh, Lê Ngọc Anh, Cao Vũ Hùng, Phạm Vân Anh, Phan Tuấn Nghĩa(1)

Tạo bộ kit phát hiện và định lượng 6 đột biến gen ty thể A3243G, G3380A, A8344G, T8993G, T8993C và G11778A của người bằng real-time PCR

Development of Real-time PCR Kit for Detection and Quantitation of Six Common Mutations A3243G, G3380A, A8344G, T8993G, T8993C, G11778A of Human Mitochondrial Genome

Tạp chí Khoa học tự nhiên và công nghệ – Đại học Quốc gia Hà Nội

2022

01

34-44

2615-9317

Gen ty thể, Định lượng, Gen A3243G, Gen G3380A, Gen A8344G, Gen T8993G, Gen T8993C, Gen G11778A, Kỹ thuật Real Time PCR

A3243G, G3380A, A8344G, T8993G, T8993C, G11778A, real-time PCR.

Trong nghiên cứu này, quy trình sản xuất bộ kit phát hiện và định lượng 6 đột biến gen ty thể của người phổ biến là A3243G, G3380A, A8344G, T8993G, T8993C, G11778A bằng real-time PCR sử dụng mẫu dò huỳnh quang dạng cầu khóa axit nucleic (LNA) được thiết lập. Quy trình bao gồm việc thiết kế các cặp mồi đặc hiệu, các mẫu dò dạng huỳnh quang cầu khóa LNA, lựa chọn dung dịch master mix và chu kỳ nhiệt. Bộ kit có độ đặc hiệu là 100% và độ nhạy ≥ 1%, khi được bảo quản trong 7 ngày ở 25 oC hoặc ở 4 oC trong 20 ngày và 6 tháng ở –20 oC vẫn cho kết quả phát hiện và định lượng các đột biến tin cậy. Bộ kit đã được sử dụng để điều tra sự có mặt các đột biến A3243G, G3380A, A8344G, T8993G, T8993C, G11778A ở 69 bệnh nhân nghi bị bệnh ty thể và 3 trường hợp mang đột biến A3243G (chiếm 4,34%) đã được phát hiện. Các thành viên gia đình của 3 bệnh nhân mang đột biến A3243G cũng được phân tích về sự có mặt và tỷ lệ đột biến, kết quả cho thấy đột biến A3243G ở các bệnh nhân này được di truyền từ mẹ sang con và tồn tại ở dạng không đồng nhất trong tế bào, tỷ lệ đột biến có tương quan với biểu hiện lâm sàng của bệnh.

A procedure for the production of a real-time PCR kit for detection and quantitation of six common mitochondrial genome mutations including A3243G, G3380A, A8344G, T8993G, T8993C, G11778A using fluorescent locked nucleic acid (LNA) Taqman probes was reported. The procedure consists of designing specific primers and LNA probes, selection of master mixture components, and real-time PCR thermal conditions. The produced kit had a specificity of 100% and sensitivity ≥ 1% and remained fully active after 7 days of storage at 25 oC or 20 days at 4 oC or 6 months at –20 oC. The kit was used to analyze A3243G, G3380A, A8344G, T8993G, T8993C, G11778A mutations from 69 patients tentatively diagnosed with mitochondrial diseases and 3 cases of A3243G carriers (4.34%) was found. In these cases, the A3243G mutation was heteroplasmic, maternally inherited, and the heteroplasmy level was shown to be related to the symptom expression.

TTKHCNQG, CTv 8

Xem toàn văn