Nghiên cứu kỹ thuật real-time PCR để kiểm tra chỉ tiêu tổng số vi khuẩn hiếu khí trong giới hạn nhiễm khuẩn của dược phẩm

Chỉ số đề mục

76

Lĩnh vực nghiên cứu

Kỹ thuật và thiết bị y học

Dạng tài liệu

BB

Tác giả

Trịnh Túy An, Lưu Quốc Khánh, Lê Văn Hoài Trân, Nguyễn Khắc Tiệp, Vũ Thanh Thảo⁽¹⁾

Nhan đề

Nghiên cứu kỹ thuật real-time PCR để kiểm tra chỉ tiêu tổng số vi khuẩn hiếu khí trong giới hạn nhiễm khuẩn của dược phẩm

Nhan đề tiếng anh

Study on real-time PCR method to examine aerobic mesophilic bacteria criteria on bacterial limits of pharmaceuticals

Nguồn trích

Tạp chí Y học Việt Nam (Tổng hội Y học Việt Nam)

Năm xuất bản

2024

Số

2

Trang

212-217

ISSN

1859-1868

Từ khóa

Real-time PCR, Giới hạn nhiễm khuẩn, Vi khuẩn hiếu khí, Dược phẩm

Từ khóa tiếng anh

Real-time PCR, Pharmaceutical Infection limits, Aerobic mesophilic bacteria, Pharmaceutical

Tóm tắt

Kiểm nghiệm giới hạn nhiễm khuẩn là yêu cầu bắt buộc đối với dược phẩm trước khi đưa vào lưu hành trên thị trường. Phương pháp real-time PCR cho phép kiểm tra nhanh sự hiện diện của các vi sinh vật trong mẫu với độ nhạy và độ chính xác cao. Mục đích: Nghiên cứu kỹ thuật real-time PCR để kiểm tra chỉ tiêu tổng số vi khuẩn hiếu khí trong giới hạn nhiễm khuẩn. Phương pháp: Phương pháp chiết RNA bằng SDS-TRIzol được khảo sát trên các chủng vi khuẩn Gram dương và Gram âm. Mồi và nồng độ mồi thích hợp để xác định mỗi chỉ tiêu được kiểm tra in silico và in vitro. Quy trình định lượng vi khuẩn bằng real-time PCR được thẩm định độ đặc hiệu, độ tuyến tính, độ chính xác, độ đúng, giới hạn định lượng (LOQ) và giới hạn phát hiện (LOD). Kết quả: Phương pháp chiết RNA bằng SDS-TRIzol cho hiệu quả chiết RNA tốt nhất với thời gian xử lý nhiệt để phá vỡ thành tế bào vi khuẩn là 5 phút và không xử lý với lysozym. Định lượng tổng số vi khuẩn hiếu khí bằng RT-qPCR với cặp mồi Bac_890F/Bac_1034R nồng độ 50 nM cho LOQ và LOD là 8 CFU/ml và 2 CFU/ml. Quy trình khảo sát đạt các yêu cầu thẩm định về độ đặc hiệu, độ tuyến tính, độ chính xác và độ đúng (RSD < 25%). Kết luận: Kỹ thuật real-time PCR có thể được áp dụng để kiểm tra giới hạn nhiễm khuẩn về tổng số vi khuẩn hiếu khí trong dược phẩm.

Tóm tắt tiếng anh

Microbiological testing is a mandatory requirement for pharmaceuticals being put into circulation on the market. Real-time PCR is a technique that enables rapid detection of microorganisms present in a sample with high sensitivity and precision. Objectives: This research aims to study real-time PCR techniques for examining aerobic mesophilic bacteria criteria of bacterial limits. Methods: The RNA extraction method using SDS-TRIzol was investigated on Gram-positive and Gram-negative bacterial strains. For each criterion on determining the bacterial limits by real-time PCR, the primers were checked in silico and in vitro, selected at the appropriate concentration. The method of quantifying microorganisms using real-time PCR was validated for specificity, linearity, precision, accuracy, the limit of quantification (LOQ), and the limit of detection (LOD). Results: The RNA extraction method using SDS-TRIzol gives the best RNA extraction efficiency with a heat treatment time to break down bacterial cell walls of 5 minutes and does not require treatment with lysozyme. Method to quantify the total number of aerobic mesophilic bacteria using RT-qPCR technique with the pair of primers Bac_890F/ Bac_1034R at a concentration of 50 nM had LOQ and LOD values of 8 CFU/ml and 2 CFU/ml, respectively. The examination method met the validation requirements of specificity, linearity, precision, and accuracy (RSD < 25%). Conclusions: The real-time PCR technique could be applied to examine aerobic mesophilic bacteria criteria of bacterial limits in pharmaceuticals.

Kí hiệu kho

TTKHCNQG, CVv 46

File toàn văn

Xem toàn văn