BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
HỆ THỐNG THÔNG TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  22,408,250
  • Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

Các công nghệ xử lý sinh học, xúc tác sinh học; lên men

Lê Thị Thu Hồng, Lương Kim Phượng, Trịnh Thị Thu Hiền, Nguyễn Thị Mai Phương, Trương Nam Hải, Đỗ Thị Huyền(1)

Nghiên cứu tạo Enterokinase tái tổ hợp có hoạt tính được biểu hiện trong escherichia coli

Tạp chí Công nghệ Sinh học - Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam

2020

3

553-560

1811-4989

Công nghệ sinh học, Nồng độ, Enzyme, Tái tổ hợp, Enterokinase

Enterokinase là một serine protease thường được ứng dụng ở một số lĩnh vực nghiên cứu công nghệ sinh học. Để sử dụng cho các mục đích đó, chuỗi nhẹ của enterokinase mang hoạt tính xúc tác của enzyme được nghiên cứu để biểu hiện tái tổ hợp vì việc tách chiết enterokinase tự nhiên thường không hiệu quả. Trong nghiên cứu này, chúng tôi trình bày các kết quả nghiên cứu tạo enterokinase chuỗi nhẹ tái tổ hợp có hoạt tính trong Escherichia coli. Protein dung hợp thioredoxin-enterokinase (trx-ent) được biểu hiện trong E. coli chỉ thể hiện hoạt tính bằng khả năng tự phân cắt khi được biểu hiện ở dạng không tan với điều kiện biến tính bằng guanidine và tái gấp cuộn phù hợp. Trong khi đó, enzyme biểu hiện ở dạng tan cũng như là dạng không tan được biến tính bằng urea thì không có hoạt tính. Nồng độ guanidine được sử dụng là 6M cùng với các điều kiện tái gấp cuộn tuần tự là các đệm oxi hóa chứa glutathione oxi hóa, tiếp theo là điều kiện khử sử dụng glutathione khử cùng với chất làm tăng khả năng tan arginine, protein dung hợp Trx-ent sau đó đã có khả năng tự phân cắt. Protein enterokinase chuỗi nhẹ tái tổ hợp có hoạt tính với kích thước khoảng 35 kDa trên điện di biến tính Tris-glycine. Những thử nghiệm ban đầu cho thấy enterokinase có khả năng phân cắt cơ chất trx- sumoprotease thành thioredoxin và sumoprotease. Kết quả này là cơ sở cho nghiên cứu tinh chế enterokinase có hoạt tính để ứng dụng trong công nghệ biểu hiện protein tái tổ hợp.

TTKHCNQG, CVv 262

Xem toàn văn
  • [1] Zheng XL, Kitamoto Y, Sadler JE (2009), Enteropeptidase, a type II transmembrane serine protease.,Front Biosci (Elite Ed): 242-249.
  • [2] Yuan L-D, Hua Z-C (2002), Expression, purification, and c-haracterization of a biologically active bovine enterokinase catalytic subunit in Escherichia coli.,Protein Expr Purif 25(2): 300-304
  • [3] Woldicke HF, Zhang X, Liu Y, Weiwei T (2013), Modified enterokinase light chain.,WO 2013/092855 Al.
  • [4] Woldicke HF, Zhang X, Liu Y, Weiwei T (2013), Modified enterokinase light chain.,WO 2013/092855 Al.
  • [5] Vozza LA, Wittwer L, Higgins DR, Purcell TJ, Bergseid M, Collins-Racie LA, LaVallie ER, Hoeffler JP (1996), Production of a recombinant bovine enterokinase catalytic subunit in the methylotrophic yeast Pichia pastoris.,Biotechnology NY 14(1): 77-81
  • [6] Tan H, Wang J, Zhao ZK (2007), Purification and refolding optimization of recombinant bovine enterokinase light chain overexpressed in Escherichia coli.,Protein Expr Purif 56(1): 40-47.
  • [7] Tan H, Wang J, Zhao ZK (2007), Purification and refolding optimization of recombinant bovine enterokinase light chain overexpressed in Escherichia coli.,Protein Expr Purif 56(1): 40-47.
  • [8] Tan H, Wang J, Zhao ZK (2007), Purification and refolding optimization of recombinant bovine enterokinase light chain overexpressed in Escherichia coli.,Protein Expr Purif 56(1): 40-47.
  • [9] Tan H, Wang J, Zhao ZK (2007), Purification and refolding optimization of recombinant bovine enterokinase light chain overexpressed in Escherichia coli.,Protein Expr Purif 56(1): 40-47.
  • [10] Smith ET, Johnson DA (2013), Human enteropeptidase light chain: Bioengineering of recombinants and kinetic investigations of structure and function.,Protein Sci 22(5): 577-585.
  • [11] Skala W, Goettig P, Brandstetter H (2013), Do-ityourself histidine-tagged bovine enterokinase: A handy member of the protein engineer’s toolbox.,J Biotechnol 168(4): 421-425.
  • [12] Sadler JE (2013), Chapter 586 - Enteropeptidase.,In Handbook of Proteolytic Enzymes: 2648-2653.
  • [13] Nguyễn Thị Mai Phương, Trịnh Thị Thu Hiền, Lê Thị Thu Hồng, Trương Nam Hải, Đỗ Thị Huyền (2018), Nghiên cứu biểu hiện enterokinase tái tổ hợp dung hợp với thioredoxin trong Esherichia coli.,Hội nghị công nghệ sinh học toàn quốc 2018: 114-119.
  • [14] Pepeliaev S, Krahulec J, Černý Z, Jílková J, Tlustá M, Dostálová J (2011), High level expression of human enteropeptidase light chain in Pichia pastoris.,J Biotechnol 156(1): 67-75.
  • [15] Peng L, Zhong X, Ou J, Zheng S, Liao J, Wang L, Xu A (2004), High-level secretory production of recombinant bovine enterokinase light chain by Pichia pastoris.,J Biotechnol 108(2): 185-192
  • [16] Niu L-X, Li J-Y, Ji X-X, Yang B-S (2015), Efficient expression and purification of recombinant human enteropeptidase light chain in Esherichia coli.,Brazilian Arch Biol Technol 58(2): 216-221.
  • [17] Melicherová K, Krahulec J, Šafránek M, Lišková V, Hopková D, Széliová D, Turňa J (2017), Optimization of the fermentation and downstream processes for human enterokinase production in Pichia pastoris.,Appl Microbiol Biotechnol 101(5): 1927-1934
  • [18] Laemmli UK (1979), Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.,Nature 227: 680-685.
  • [19] Kitamoto Y, Yuan X, Wu Q, McCourt DW, Sadler JE (1994), Enterokinase, the initiator of intestinal digestion, is a mosaic protease composed of a distinctive assortment of domains.,Proc Natl Acad Sci USA 91(16): 7588-7592
  • [20] Huang L, Ruan H, Gu W, Xu Z, Cen P, Fan L (2007), Functional expression and purification of bovine enterokinase light chain in recombinant Escherichia coli.,Prep Biochem Biotechnol 37(3): 205217.
  • [21] Hermon Taylor J, Perrin J, Grant DAW, Appleyard A, Bubel M, Magee AI (1977), Immunofluorescent localisation of enterokinase in human small intestine.,Gut 18(4): 259-265
  • [22] Đặng Thị Ngọc Hà, Lê Thị Thu Hồng, Đỗ Thị Huyền, Trương Nam Hải (2017), Nghiên cứu lựa chọn điều kiện biểu hiện kháng thể đơn chuỗi tái tổ hợp nhận biết kháng nguyên nhóm máu A trong chủng Escherichia coli.,Tạp chí Sinh học 39(2): 191-198.
  • [23] Gasparian ME, Ostapchenko VG, Schulga AA, Dolgikh DA, Kirpichnikov MP (2003), Expression, purification, and c-haracterization of human enteropeptidase catalytic subunit in Escherichia coli.,Protein Expr Purif 31(1): 133-139.
  • [24] Gasparian ME, Ostapchenko VG, Dolgikh DA, Kirpichnikov MP (2006), Biochemical c-haracterization of human enteropeptidase light chain.,Biochem 71(2): 113-119.
  • [25] Collins-Racie LA, McColgan JM, Grant KL, Diblasio-Smith EA, McCoy JM, Lavallie ER (1995), Production of recombinant bovine enterokinase catalytic subunit in Escherichia coli using the novel secretory fusion partner dsba.,Bio/Technology 13(9): 982-987.
  • [26] Chun H, Joo K, Lee J, Shin HC (2011), Design and efficient production of bovine enterokinase light chain with higher specificity in E. coli.,Biotechnol Lett 33(6): 1227-1232.